载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
载体保藏法操作步骤
1.滤纸保藏法
(1)将滤纸剪成0.5×1.2cm 的小条,装入0.6×8cm 的安瓿管中,每管1—2 张,塞以棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃** 30 分钟。
(2)将需要保存的菌种,在适宜的斜面培养基上培养,使充分生长。
(3)取**脱脂牛乳1—2ml 滴加在**培养皿或试管内,取数环菌苔在牛乳内混匀,制成浓悬液。
(4)用**镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内,使其吸饱,再放回至安瓿管中,塞上棉塞。
(5)将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中,用真空泵抽气至干。
(6)将棉花塞入管内,用火焰熔封,保存于低温下。
(7)需要使用菌种,复活培养时,可将安瓿管口在火焰上烧热,滴一滴冷水在烧热的部位,使玻璃破裂,再用镊子敲掉口端的玻璃,待安瓿管开启后,取出滤纸,放入液体培养基内,置温箱中培养。
**、酵母菌、丝状**均可用此法保藏,前两者可保藏2 年左右,有些丝状**甚至可保藏14—17 年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便,不需要特殊设备。
2.沙土保藏法
(1)取河沙加入10%稀**,加热煮沸30 分钟,以去除其中的有机质。
(2)倒去酸水,用自来水冲洗至中性。
(3)烘干,用40 目筛子过筛,以去掉粗颗粒,备用。
(4)另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土,加自来水浸泡洗涤数次,直至中性。
(5)烘干,碾碎,通过100 目筛子过筛,以去除粗颗粒。
(6)按一份黄土、三份沙的比例(或根据需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)掺合均匀,装入10×100mm的小试管或安瓿管中,每管装1g 左右, 塞上棉塞,进行**,烘干。
(7)抽样进行无菌检查,每10 支沙土管抽一支,将沙土倒入肉汤培养基中,37℃培养 48 小时,若仍有杂菌,则需全部重新**,再作无菌试验,直至证明无菌,方可备用。
(8)选择培养成熟的(一般指孢子层生长丰满的,营养细胞用此法效果不好) 优良菌种,以无菌水洗下,制成孢子悬液。
(9)于每支沙土管中加入约0.5ml(一般以刚刚使沙土润湿为宜)孢子悬液, 以接种针拌匀。
(10)放入真空干燥器内,用真空泵抽干水分,抽干时间越短越好,务使在12小时内抽干。
(11)每10 支抽取一支,用接种环取出少数沙粒,接种于斜面培养基上,进行培养,观察生长情况和有无杂菌生长,如出现杂菌或菌落数很少或根本不长,则说明制作的沙土管有问题,尚须进一步抽样检查。
(12)若经检查没有问题,用火焰熔封管口,放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。
(13)需要使用菌种,复活培养时,取沙土少许移入液体培养基内,置温箱中培养。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌,因此在***工业生产中应用*广,效果亦好,可保存2 年左右,但应用于营养细胞效果不佳。
上一篇:菌株保存方法(四)——寄主保藏法